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点样除另有规定外,用点样器点样于薄层板上,一般为圆点,点样基线距底边2.0cm,样点直径及点间距离同纸色谱法,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。点样直径不超过5mm,点样距离一般为1~1.5cm即可。样品在溶剂中的溶解度很大,原点将呈空心环——环形色谱效应。因此配制样品溶液时应选择对组分溶解度相对较小的溶剂。点样方式有点状点样和带状点样。

怎样提高点样效率? 

点样是造成TLC定量误差的主要来源。实验证明:定量毛细管更适合较小体积的点样;微量注射器更适合较大体积的点样。这主要是因为微量注射器受小气泡、溶液回爬现象的影响较大。为避免不同定量毛细管间的点样误差、建议一块薄层板上最好用同一只定量毛细管。但应注意更换样品时,应将毛细管用超声波或不同极性溶剂清洗干净。在制备样品时,溶样溶剂黏度不能过高,以便于点样;溶剂沸点过低则进样体积易变,过高则会改变展开剂组成;对样品溶解度过高会使样点发生空心现象;常用的溶剂为甲醇、乙醇、**。经典TLC样点原点一般为直径3mm点间距1--2cm 底边距1.5cm;HPLC样点原点一般为直径1mm点间距5mm 底边距1cm。

不同溶剂对样品的洗脱能力不同,因此在点样的同时,样品在原点开始呈环形展开,如果样品在溶剂中的溶解度很大,原点将变成空心环,Kaiser称这种现象为“点样环形色谱效应”。这种效应对随后的线形展开造成不良影响,因此配制样品溶液时应选用对组分溶解度相对较小的溶剂;溶剂的粘度不宜过高,以便于点样,溶剂的沸点要适中,沸点过低由于挥发会改变样品溶液浓度导致较大误差,沸点过高,样品溶液的溶剂会在原点残留,导致改变展开剂的选择性,特别是样品溶液的溶剂与展开剂的极性相差较大时更为明显,最常用的溶剂为甲醇及乙醇,有时也用丙酮。点样后必须将溶剂全部除去后再进行展开,但要避免高温加热,以免改变待测成分的性质。

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